细胞铺板小技巧

二、细胞培养器皿的选择

1）细胞培养瓶

细胞培养瓶是细胞长期培养、大量扩增和防止污染（瓶口较小，与外界接触面积较小，细胞不易被污染）的最适培养器皿。用细胞培养瓶处理细胞操作方便、安全，可确保实验流程顺利进行。

细胞培养瓶表面主要有TC处理和未TC处理，对于贴壁细胞，适合选择表面TC处理的细胞培养瓶，可以满足细胞的贴壁生长。

细胞培养瓶瓶盖主要有透气盖和密封盖两种，可根据培养细胞对氧气或二氧化碳的需求程度来选择。

2）细胞培养皿

细胞培养皿可用于简单的细胞培养或样本培养，适合临时或短期培养，做对照实验比较方便。相较于细胞培养瓶，培养皿开口大，与外界接触的面积更大，容易造成污染，操作时需特别注意。

3）细胞培养板

细胞培养板是进行微量的多次重复实验的最适培养器皿，可根据具体的实验要求来选择，一般流式分体、提取蛋白用6孔板，细胞爬片、转染和侵袭用24孔板，MTT、CCK8和药物浓度IC50用96孔板。通常细胞培养板外围孔液体蒸发和气体交换的速率会比中间孔快，即“边缘效应”，建议在96孔板的外围孔加一圈PBS，可有效避免边缘效应。

三、细胞铺板小技巧

1）制备单细胞悬液

对于贴壁细胞，要选择合适的消化液，合适的消化温度和时间，避免过度消化使细胞状态变差。离心时转速不可太快，离心力太大容易导致细胞抱团。离心后充分悬浮，操作时动作轻缓，切忌过度吹打影响细胞活力。

根据选择的培养器皿所需的接种量，调整细胞浓度，细胞密度对于铺板十分重要，过密容易造成细胞居中，过稀，细胞难以生长起来。

2）铺板

● 6孔板、12孔板、24孔板

先用少量无血清培养基浸润孔底，有利于细胞铺板。然后倾斜枪头，从孔的左边靠近底部（注意不要戳到底部，保持一点距离）缓慢加入细胞悬液，使细胞均匀的分散在孔底。最后，十字晃动培养板，即上下左右移动，切忌转圈，晃动结束将培养板放置在显微镜工作台上静置一段时间，待细胞贴壁后移入二氧化碳培养箱培养。

● 96孔板

铺96孔板建议使用排枪（注意一排枪头吸取的细胞悬液液面齐平，体积一致），倾斜枪头，从孔的左边靠近底部（注意不要戳到底部，保持一点距离）缓慢加入细胞悬液，使细胞均匀的分散在孔底，按一半一半方法来加，即加完半边培养板，重新混匀剩余细胞悬液，再加另外半边培养板。加液完成后，盖上培养板盖子，用左手固定住培养板的左边，右手轻缓敲击培养板的右边缘三次，将培养板放置在显微镜工作台上静置一段时间，待细胞贴壁后移入二氧化碳培养箱培养。

四、注意事项

1）使用状态良好的细胞进行铺板，避免使用传代次数过多，老化的细胞，容易导致铺板后细胞状态不好，影响实验进度。

2）避免胰酶消化过度，导致细胞结团太多，难以将细胞吹打分散均匀。消化过度也会影响细胞活力。